Détection des variants de petite taille
Il n'entre pas dans les objectifs de ce chapitre de décrire en détail les techniques de laboratoire nécessaires à l'analyse de l'ADN à but diagnostique, mais seulement de passer en revue quelques données générales. D'un point de vue très pratique, rappelons ici que la culture de lymphocytes requiert du sang prélevé sur tube hépariné. Toutes les technologies basées sur l'étude de l'ADN (séquençage, analyse chromosomique sur puce ADN [ACPA]) se font à partir de sang prélevé sur tube anti coagulé à l'EDTA (éthylènediaminetétraacétique). La récolte de l'ARN requiert des tubes spécifiques (par exemple : tubes PAXgene® qui assurent sa stabilité).
Amplification de l'ADN par PCR
La réaction en chaîne de la polymérase, ou PCR, est une technique d'amplification d'un fragment d'ADN délimité par deux oligonucléotides synthétiques (appelés amorces) complémentaires des bornes du segment que l'on veut étudier. Plusieurs cycles de synthèse/dénaturation de l'ADN permettent d'amplifier spécifiquement le segment d'ADN délimité par les deux amorces. La quantité d'ADN nécessaire peut être très réduite : dans le cadre du diagnostic pré-implantatoire, la PCR est faite à partir de l'ADN d'une seule cellule ! Le fragment amplifié peut être analysé par diverses techniques ou servir lui-même de sonde. Des artifices techniques permettent de réaliser simultanément plusieurs PCR en parallèle (PCR multiplex). La sensibilité des techniques de PCR les rend très sensibles aux contaminations par les ADN exogènes....